無機磷檢測試劑盒(米吐爾鉬藍比色法)培養操作

無機磷檢測試劑盒(米吐爾鉬藍比色法)

產品簡介：

血清中的無機磷(Inorganic phosphorous)主要由HzPO4和HPO2兩種磷酸根陰離子組成，上述陰離子在不同的pH環境下能快速相互轉換。在pH7.4血清中兩種磷酸根陰離子濃度比例為1:4,在酸中毒環境下二者濃度約為1:1,在堿中毒環境下二者濃度比例為1:9,在pH4.5尿液中濃度比例為100:1。WHO推薦的常規檢測方法為比色法，我國衛生部臨檢中心推薦的常規方法為硫酸亞鐵鉬藍比色法和米吐爾鉬藍比色法。

雅吉無機磷檢測試劑盒(米吐爾鉬藍比色法)利用無機磷在酸性條件下與鉬酸銨結合生成磷鉬酸銨，后者被米吐爾還原成藍紫色的復合物，通過分光光度計測定650nm處吸光度，根據公式計算出無機磷含量。

本試劑盒僅用于科研，不宜用于臨床診斷或其他用途。

產品組成：

自備材料：

1、離心管或試管

2、水浴鍋或恒溫箱

3、比色杯

4、分光光度計

操作步驟(僅供參考)：

1、(選做)制備樣品:

①血漿、血清樣品:血漿、血清按照常規方法制備,可以直接用于本試劑盒的測定，-20℃凍存，用于Pi的檢測。

②細胞或組織樣品:取恰當細胞或組織進行勻漿，低速離心取上清，-20°℃凍存，用于Pi的檢測。

③高濃度樣品:如果樣品中含有較高濃度的Pi，可以蒸餾水稀釋。

④(選做)樣品準備完畢后可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度，以便于后續計算單位蛋白重量組織或細胞內的Pi含量。

2、配制磷標準工作液:取適量的磷標準(1mg/ml)，按磷標準(1mg/ml):標準品稀釋液=1:24的比例稀釋，即獲得磷標準工作液(1.292mmol/L)，-20C凍存，用于Pi的檢測。

3、配制米吐爾鉬藍顯色工作液:取1支0.35g的米吐爾，充分溶解于50ml Pi Assay Buffer，即為米吐爾鉬藍顯色工作液。4℃避光保存，一般建議3天內用完。

4、Pi加樣:按照下表設置空白管、標準管、測定管，溶液應按照順序依次加入，并注意避免產生氣泡，小心混勻。如果樣品中的無機磷濃度過高，可以減少樣品用量或適當稀釋后再進行測定，樣品的檢測最好能設置⒉平行管，求平均值。

5、Pi測定:混勻，37°C孵育10min，比色杯光徑1.0cm，以空白調零，分光光度計650nm處測定，讀取各管吸光度(即為A_標準，A_測定)。

計算:

血清、血漿中無機磷計算公式:磷(mmol/L)=(A_測定/A_標準)×1.292

組織中磷計算公式:磷(mmol/mg)=(A_測定/A_標準)×1.292/待測樣品蛋白濃度(mg/L)

式中:

A_測定=待測管的吸光度

A_標準=標準管的吸光度

N=尿液稀釋倍數

單位換算:mg/dl=mmol/L/0.323

參考區間∶

健康成年人血清磷濃度:0.96~1.62mmol/L(3~5mg/dl)

兒童血清磷濃度:1.45~2.1mmol/L(4.5~6.5mg/dl)

注意事項∶

1、米吐爾鉬藍顯色工作液配制后，盡快使用，放置過久會導致正常血清液產生輕度渾濁。

2、如果樣品濃度過高，應用蒸餾水稀釋后重測，結果乘以稀釋倍數。

有效期:12個月有效。常溫運輸，4℃保存。

附錄1:利用本法檢測血清白蛋白比值倒置的樣品時，易導致渾濁，可對樣品進行取蛋白處理。操作如下:取0.1ml待測血清，加入0.9ml Pi去蛋白試劑，充分混勻，低速離心，取上清液0.05ml。磷標準工作液(1.292mmol/L)同樣進行處理，其余同上述操作。

附錄2︰參考標準曲線范圍: 雅吉生物測定磷標準在1.292mmol/時，通過分光光度計測定其吸光度多在0.04~0.1之間(以空白調零)。雅吉生物測定磷標準在0.1615、0.323、0.646、0.969、1.292、2.584、5.168mmol/L時的吸光度，根據測算濃度在O~0.5mmol/L之間及在5.168mmol/L時其結果不可靠,雅吉生物以0.646,0.969、1.292、2.584mmol/L作出其標準曲線如下