流式細胞術操作步驟指南

流式細胞術具體步驟

1、首先，制備單細胞懸液

將待測細胞或微粒制成單細胞懸液，經特異性熒光染料標記抗體進行染色，在恒定氣體的壓力下進入流動室，不含細胞或

微粒的緩沖液在高壓下從鞘液管噴出，鞘液管入口方向與待測樣品流形成一定角度，鞘液包繞著樣品高速流動，

組成一個圓柱形的液流束，待測細胞或微粒在鞘液的包被下單行排列，依次通過檢測區域。

2、其次，收集單細胞上的熒光信號

流式細胞儀通常以激光作為發光源，經過聚焦整形后的光束垂直照射在樣品流上，細胞或微粒上的熒光染料被激發，

產生散射光和激發熒光。光散射信號在前向小角度進行檢測，這種信號基本上反映了細胞體積的大小；熒光信號的接受方向

與激光束垂直，經過一系列雙色性反射鏡和帶通濾光片的分離，形成多個不同波長的熒光信號。

3、再次，統計結果

熒光信號的強度代表了所測細胞膜表面抗原強度或細胞內物質的濃度，經光電轉換變為可被計算機識別的數字信號。

計算機把所測量到的各種信號進行計算機處理，將分析結果顯示在計算機上。

4、最后，做細胞分選

細胞的分選是指根據所測定的各個參數將的細胞從細胞群體中分離出來的一種方式，通過分離含有單細胞的液滴實現

。在流動室的噴口上方配有一個超高頻的壓電晶體，產生的振動使噴出的液流形成均勻的液滴，待測細胞就分散在這些液滴

之中。將這些液滴充以正負不同的電荷，當液滴流經帶有幾千伏特的偏轉板時，在高壓電場的作用下偏轉，落入各自的收集

容器中，不予充電的液滴落入中間的廢液容器，從而實現細胞的分離。