細(xì)胞復(fù)蘇過程

真核細(xì)胞通常懸浮在帶有血清和冷凍劑的培養(yǎng)基內(nèi)，保存在-196°C 的液氮中。如果是商業(yè)訂購的，通常儲存在用干冰包裹

的凍存管中。所以凍存后的細(xì)胞必須快速解凍后立即培養(yǎng)，以獲得最大的生存能力，為了除去凍存時(shí)的添加劑， 

24 小時(shí)后要更換培養(yǎng)基。

一、材料

培養(yǎng)基， 37’C 預(yù)熱

培養(yǎng)瓶

裝有70 ％乙醇的燒杯

1ml 、10ml 的移液管、移液器及移液頭

二、步驟

把凍存細(xì)胞的管子在37’C 的水浴融化，快速搖動(dòng)， 1分鐘內(nèi)使管內(nèi)的細(xì)胞融化。

把融化的管子浸入裝有70 ％乙醇的燒杯內(nèi)，整個(gè)實(shí)驗(yàn)在超凈臺內(nèi)進(jìn)行。

小心打開凍存管，不要讓乙醇浸入管內(nèi)。

將凍存管內(nèi)的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶中，并立即加入預(yù)熱的培養(yǎng)基。

蓋好培養(yǎng)瓶的蓋子，培養(yǎng)24 小時(shí)。

用新培養(yǎng)基替換老培養(yǎng)基。

繼續(xù)培養(yǎng)2~3 天或按說明書上的建議進(jìn)行操作。

三、溫馨提示

1.融解的細(xì)胞必須馬上培養(yǎng)，如果來不及培養(yǎng)，就保存在液氮中。

2.細(xì)胞通常凍存為1 ml 的體積，加入新的培養(yǎng)基至10ml 。

3.可以在融化了凍存細(xì)胞后，把細(xì)胞離心下來，并用新鮮的培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞，這種做法只適用于那些對凍存劑敏感的細(xì)胞，或者笫二天因?yàn)橛惺虏荒芨鼡Q新培養(yǎng)基的情況。