TMB底物顯色試劑盒(ELISA，HRP顯色)實驗操作

TMB底物顯色試劑盒(ELISA，HRP顯色)

一、產品簡介：

3,3',5,5'-四甲基聯苯胺(TMB)是非常好的酶免試驗顯色劑，能溶解于多種有機溶劑和雙蒸水中，為穩定的無色溶液，與適量過氧化脲或雙氧水與緩沖液混勻后與過氧化物酶作用產生清晰的藍色產物，極易觀察。由于其靈敏度高，配制后的工作液穩定，加上無致癌特性，被廣泛用于酶聯免疫(ELISA)試驗和尿試紙的檢測反應等，TMB主要應用于酶聯免疫吸附實驗(ELISA)，經典的方法是采用A、B液分開配制，使用前再混合的方法，并且長期存放穩定，本試劑一般情況下為無色，有時略顯淺藍色或淺黃色。

雅吉生物的TMB底物顯色試劑盒(ELISA,HRP顯色)主要由TMB顯色液、TMBbuffer、TMB氧化劑組成，其特點是：

1、靈敏度高；

2、穩定性好，顯色終止后讀數穩定；

3、背景低：底物溶液在450nm檢測時OD值一般小于0.05。

該試劑僅用于科研領域，不用于臨床診斷或其他用途。

二、產品組成：

三、自備材料：

1、酶標儀

2、酶標板、96孔板

3、恒溫箱(備選)

4、(備選)終止液：鹽酸或硫酸等

四、操作步驟(僅供參考)：

1、用適當的干凈容器(用純凈水反復沖洗)，取試劑(A)、(B)、(C)，按A：B：C=5000：5000：4的比例混合，即為TMB顯色工作液，待達到室溫后即可使用。

2、加液：加完HRP結合物并溫育一定時間，洗板3～5次，每孔加TMB顯色工作液100μl，在室溫(15～25℃)或37℃下溫育10～30分鐘。

3、(選做)終止：加等體積的1M鹽酸或硫酸溶液終止反應，孔中反應液由藍色變為黃色。

4、讀數：30min內在450nm處讀數。

五、注意事項：

1、本試劑盒給予的TMB氧化劑多于實際使用量，請按比例使用。

2、TMB氧化劑易揮發，請注意密閉保存，以免效率下降，一旦開封請盡快使用。

3、TMB氧化劑有腐蝕性，請勿直接接觸于人皮膚、毛發等。

4、如果出現高的反應背景或沉淀，表明TMB底物反應過于強烈。

5、終止反應不是必須步驟，如不加終止液應顯色完成后立即檢測。

6、一般市售的濃鹽酸為11.6M，濃硫酸為18.3M，但應注意其揮發性。

7、為了避免產生沉淀，可在終止后馬上讀數，或進一步稀釋一抗和/或HRP結合物，再次進行試驗。

8、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

六、有效期：12個月內有效。

七、運輸及保存：4℃運輸，4℃保存。