流式抗體（熒光抗體）細胞染色步驟與注意事項

流式抗體（熒光抗體）細胞染色步驟與注意

染色緩沖液（BSA）的配制：

PBS含有1% FBS和0.09% NaN3，置于冰上或4度冰箱備用。

準備單細胞懸液：淋巴組織、骨髓、血液或培養的細胞。

用冰染色緩沖液洗細胞2次，離心細胞，用冰染色緩沖液重懸細胞，使終濃度為2×107細胞/ml。

各取50ul（106細胞）細胞懸液到2個圓底的Ep管中。

根據抗體說明書在其中1個Ep管中加入合適的抗體量，另外1個加入同型對照抗體，冰上避光孵育20分鐘（建議每5分鐘輕輕混勻，以免細胞沉積）。根據熒光抗體的親和力適當延長染色時間。

用1ml染色緩沖液洗2次去除未結合的抗體，300×g離心5分鐘，每次離心后小心吸取上清。

用適量染色緩沖液（如500ul）重懸細胞。

流式細胞儀分析染色結果（不超過4小時）。如果暫時無法檢測，也可以將染色后的細胞用4%多聚甲醛固定后，避光儲存在4度。固定后的細胞可以保存zui多一個星期。