支原體污染處理技巧

細胞增殖速度怎么變得這么慢了？細胞發(fā)生病變，出現(xiàn)細胞變圓、從培養(yǎng)瓶壁脫落又是什么情況？要瘋了，培養(yǎng)細胞怎么就這么難呢~實驗過程中存在的“幽靈"，即使是經(jīng)驗豐富的老研究員也不得不面對，沒錯，它就是支原體感染。

支原體感染的威脅

支原體感染率高達63%，這也使得在細胞培養(yǎng)過程中“支原體污染"問題變成全球性，只要提及支原體污染，研究員往往都會陷入困惑。

它是一種類似細菌但不具有細胞壁的原核微生物，直徑在 50-300 nm，可輕松通過0.22um濾膜混入培養(yǎng)系統(tǒng)中，普通的抗生素（如培養(yǎng)細胞常用的雙抗）對它不起作用。

而且細胞培養(yǎng)物被支原體污染后往往沒有明顯的跡象，不像細菌或真菌污染有肉眼可見的變化，甚至細胞本身仍能在一段時間內(nèi)繼續(xù)維持正常的形態(tài)和增殖速率。

這些特點給我們判斷和處理支原體污染帶來了一定的麻煩。

1. 可能導致實驗結(jié)果不準確，因為支原體會與培養(yǎng)基中的其他成分相互作用，影響其他微生物的生長，從而干擾實驗結(jié)果的收集和分析。

2. 支原體污染可能會對實驗設備和儀器造成損害，尤其是對實驗室的生物安全柜和其他相關(guān)設備，因為支原體會在其上生長并形成菌膜，影響設備的正常運行。如果支原體數(shù)量較少，可能不會對測序結(jié)果產(chǎn)生明顯影響。

3. 如果支原體數(shù)量較多，它們可能會在測序過程中影響樣本的質(zhì)量，從而導致測序結(jié)果不準確。此外，支原體污染可能會導致樣本中的序列 reads 數(shù)量減少，從而影響序列組裝和基因表達分析等后續(xù)分析結(jié)果。

因此，在進行測序前，應該采取適當?shù)拇胧﹣肀苊夂蜏p少支原體污染，如使用無菌技術(shù)、嚴格控制實驗室環(huán)境、使用高質(zhì)量的試劑和儀器等。如果已經(jīng)出現(xiàn)了支原體污染，應該及時檢測和處理，以減少對測序結(jié)果的影響。

支原體檢測方式

對此我們并非手足無措，通過嚴密的消毒措施和合理的實驗室管理，我們可以有效預防支原體感染，保障研究的順利進行。有鑒于支原體污染對細胞生物學實驗的重要負面影響，定期檢測細胞是否被支原體污染成為了很多實驗室的必然選項。

常見的支原體檢測技術(shù)包括：分離培養(yǎng)法，DNA熒光染色檢測法等等，但這里更推薦使用等溫擴增法。其中分離培養(yǎng)法和DNA應該染色法操作難度較高，而等溫擴增法作用濃度低，細胞毒性小，使用方便，即拆即用，只要添加到支原體污染的培養(yǎng)細胞中孵化一周即可。