ATCC細胞：凍存和復蘇具體步驟解析

ATCC細胞種類繁多，涵蓋超過1000種動物細胞系和7000種微生物菌種，涉及動物、植物、微生物等多個領域，是全球科學研究的重要資源。這些細胞系經過嚴格的質量控制和驗證，包括形態學檢查、遺傳學分析和無污染檢測，確保其可靠性和純度。例如，ATCC提供的細胞系如RAW264.7、HEK293、Vero E6等，均通過了STR分析和污染檢測，用于多種生物學研究。

ATCC細胞的凍存具體步驟：

選擇對數生長期的健康細胞（此時增殖活躍），用胰酶消化貼壁細胞（懸浮細胞直接收集），離心（125g×10min）棄上清

配制含保護劑的冷凍液：無血清冷凍液（如貨號C7001）

或

含10% DMSO +90% FBS/培養基

重懸細胞至密度為1×10?~5×10? cells/mL

分裝至標記好的冷凍管（含細胞名稱/日期/代數），密封

程序降溫：

方法：程控冷凍儀（-1°C/min）

替代方法：

先放于-80°C冰箱24小時（用聚苯乙烯盒隔熱）

再轉入液氮氣相層長期保存（<-130°C）

ATCC細胞的復蘇具體步驟：

提前準備：

預熱培養基至37°C

調節CO?培養箱條件（通常37°C,5% CO?）

快速解：

從液氮取出冷凍管→立即浸入37°C水浴搖晃至冰晶融化（約1~2分鐘）

去除DMSO：

轉移細胞懸液至含9mL培養基的離心管

離心125g×10min棄上清（去殘留DMSO）

重懸接種：

用新鮮培養基重懸細胞→接種至培養瓶

后續觀察：

24小時后換液并評估貼壁/存活率

注：雜交瘤等敏感細**胞可能需要數天恢復

鍵注意事項：

全程無菌操作（酒精消毒冷凍管表面）

避免溫度波動：

不可將細胞存放于-80°C超過24小時

解速必須快過臨界溫區（-5~0°C）

記錄代數/狀態：

ATTC細胞超過50代建議棄用

推薦使用10代細胞實驗