Bst 4.0 LowSalt Red Bead試劑

Bst 4.0 LowSalt Red Bead試劑為全體系凍干微球制品，內含恒溫擴增所用

的低緩沖鹽（Low Salt）、Mg

2+、dNTP、Bst 4.0 DNA/RNA

聚合酶、紅黃 pH 變色染料。由于 LAMP 在反應時會產生

大量的 H+，導致反應體系 pH 下降，因此，低緩沖鹽體

系條件下，可搭配 pH 敏感染料實現可視化檢測 LAMP 檢

測。該制品中包含低濃度的 Tris（pH8.8）緩沖鹽。

貨 號 名 稱 規格

A3828-01R Bst 4.0 LS Red Bead 100 個

儲存：-20℃保存 2 年；室溫（25℃）保存>6 個月。

使用實例：

1. 配制反應體系

Bst 4.0 LS Red Bead 1 粒

10xLAMP Primer Mix 2.5 μl

模板 DNA/RNA X μl

ddH2O 到液體總量 25 μl

2. 蓋上管蓋，置于 65°C 進行反應 20~30min。 肉眼觀

察結果，黃色為陽性，紅色為陰性。

3. 10xLAMP Primer Mix 的配制，FIP/BIP 分別為 16 μM、

LoopF/B 分別為 4~8 μM、F3/B3 分別為 2 μM。引物的稀

釋液均使用 ddH2O（pH8.0-9.0），不能使用含有 Tris 緩

沖鹽系統。由于該變色方法對 pH 敏感，多數情況下引物

溶解后成酸性，因此在 10x 引物中加入終濃度 1 mM

NaOH 使引物恢復到中性 pH（~8.5），注意 NaOH 需新

鮮配制，可配制成 50-100 mM 濃度使用。

注意事項：

（1）紅黃變色反應依賴于反應體系中 pH 的變化來實現，

因此模板中 Tris 鹽、NaOH 等成分對反應有至關重要的

影響。在采用核酸純化的樣本檢測時，推薦使用 ddH2O

進行洗脫。

（2）關于 DEPC 水使用的特殊說明：由于 DEPC 處理過

的 ddH2O 顯示很強的酸性，會直接導致溶解后的凍干球

成黃色。所以 DEPC 處理過的 H2O 必須經 NaOH 溶液調

整 pH 到 8.0-9.0 后方可使用。我們推薦直接使用，水機

制備的 18.2Ω H2O，不影響 RNA 樣本的擴增。

（3）在對粗制樣本進行檢測時，最佳的粗制樣本為拭孖

樣本，拭孖樣本經 ddH2O 浸泡后，可以直接使用浸泡液

作為模板進行擴增，無需核酸純化步驟。

（4）關于 LAMP 成品試劑的建議， Bst 4.0 LS 凍干球

為室溫穩定狀態，可長期保存。將擴增引物于 70°C 烘干，

再加入一粒凍干球即可制備成全體系檢測試劑。

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