2XRAPA HiFi PCR Mix試劑

2XRAPA HiFi PCR Mix試劑其來源于高保真DNA聚合酶，并加入了Sso7d延伸結合域，能夠提高反應速度、保真度和穩定性。該HiFi PCR Mix為單酶制品，不含其它DNA聚合酶，具有超保真擴增性能（~280倍Taq）、長片段擴增能力、高產量等優勢。RAPA HiFi DNA聚合酶在保真性方面與Q5 DNA聚合酶相似，在優化的反應緩沖液中，RAPA HiFi PCR Mix在長片段擴增、產量、成功率方面要超過Q5 PCR Mix。使用該酶可輕松擴增8kb的基因組片段，20kb的λ DNA，8kb的cDNA。RAPA HiFi DNA聚合酶具有6kb/min以上的擴增速度。對于常規或GC含量≤ 65%的復雜模板，使用該制品可以進行可靠的、的擴增。對于高GC含量的模板（＞65%），添加5×Q-Solution（Cat. No.: A3002）確保最大的擴增性能。該HiFi PCR Mix具有5'-3'的聚合酶活性、3'-5'的強外切酶活性，產物為平末端。

特征

超保真擴增：~280倍Taq的保真性能，是載體構建、點突變、NGS模板擴增、基因合成的最佳用酶。 快速擴增：具有6kb/min的擴增能力。 長片段擴增：質粒、λ DNA 等簡單模板可以有效擴增>20 kb，基因組可以有效擴增>8 kb，cDNA可以有效擴增>8kb。

儲存

長期儲存置于-20°C以下，可保存2年，避免反復凍融；短期使用置于4°C（3個月）保存，一經融化后請放置于4°C，勿再凍存。

反應實例

1. 長片段擴增能力

分別以λDNA、human gDNA、human cDNA為模板，使用RAPA HIFI PCR Mix進行擴增，循環數統一為28 cycles，結果如上圖所示，對于不同種類DNA模板的長片段靶基因，RAPA HIFI PCR Mix均有良好的擴增性能。

常見問題及解決方案：

無擴增或產量低 循環數 退火溫度 模板DNA純度和用量 延伸時間 引物用量 引物設計 增加循環數至35~40cycles 以2℃為單位降低退火溫度 使用高純度的模板DNA，使用合適的模板量。 適當增加延伸時間 在0.1μM~0.5μM之間選取合適的引物量 重新設計優化引物 出現雜帶或Smear 退火溫度 引物濃度 循環數 模板DNA使用量 引物 以2℃為單位提高退火溫度 降低引物濃度至0.2μM 降低循環數至25~28cycles 使用合適的模板量，不要過多使用 重新設計優化引物

2XRAPA HiFi PCR Mix試劑恒溫擴增使用策略及實例展示

應用實例1：A3825-01 紅黃變色反應（肉眼觀察）

以 體外轉錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結束反應起始前，下圖為 65 度反應 30min 后。

應用實例2：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應。以體外轉錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應25min的檢測結果，可以看到檢測反應<20min(達平臺期)。

應用實例3： 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略，在反應結束后，倒置反應管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現出醒目的綠色，陰性表現出橙色，區分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質耐受性很好。以體外轉錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應20min后檢測結果。

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