ThermoStable V Reverse transcriptase試劑

ThermoStable V Reverse transcriptase試劑是在鼠源病毒反轉錄酶基礎上進行定點突變改良而得。

該酶去除了RNase H活性中，從而避免反轉錄過程中降解RNA。同時經過突變文庫篩選，使得其熱穩定性更強，

可耐受65℃高溫反應。相比于低溫條件下反轉錄反應，采用高溫反轉錄可顯著打開RNA二級結構，

從而提高復雜RNA模板的擴增性能、提高反轉錄cDNA的長度和產量，從而提高后續檢測的靈敏度。

組分

組分名稱數量

ThermoStable V RTase (200 U/μl)100 μl

10×RT Buffer1 ml

單位定義

以poly(rA)為模板、oligo(dT)為引物，在37°C條件下，10分鐘內催化1 nmol的dTTP摻入形成酸不溶性沉淀物所需要的酶量，

定義為一個活性單位。

儲存

-20°C可保存2年。

ThermoStable V Reverse transcriptase試劑恒溫擴增使用策略及實例展示

應用實例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應。以體外轉錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應25min的檢測結果，可以看到檢測反應<20min(達平臺期)。

應用實例2： 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略，在反應結束后，倒置反應管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現出醒目的綠色，陰性表現出橙色，區分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質耐受性很好。以體外轉錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應20min后檢測結果。

應用實例3：A3825-01 紅黃變色反應（肉眼觀察）

以 體外轉錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結束反應起

始前，下圖為 65 度反應 30min 后。