酵母焦磷酸酶試劑

酵母焦磷酸酶試劑純化自重組 E. coli 菌株，攜帶有從釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）克隆的 ppa 基因和蟾分枝

桿菌（Mycobacterium xenopi）GyrA 內(nèi)含肽的融合基因。該焦磷酸酶催化無機(jī)焦磷酸鹽水解生成正磷酸鹽

：P207–4 + H20 →2HP04–2。在核酸擴(kuò)增實驗中，其可解除生成的無機(jī)焦磷酸鹽對反應(yīng)體系的抑制。

組分

組分名稱數(shù)量

Yeast Pyrophosphatase (0.1 U/μl)200 μl/1 ml

應(yīng)用

反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中提高 RNA 產(chǎn)量

增強(qiáng) DNA 復(fù)制

活性定義

1 單位指標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)條件下（20mM Tris-HCl，pH 7.5，2mM MgCl2，2mM PPi，25℃ 反應(yīng) 10 分鐘）每分鐘催化無機(jī)焦磷酸鹽生成1μmol 磷酸鹽所需的酶量。

儲存

-20℃可保存3年。

使用注意事項

（1） 該酶在多種反應(yīng)Buffer中均具有活性，通常該酶在HDA擴(kuò)增、LAMP擴(kuò)增等實驗中，可直接接入即可。

（2） 該酶的用量在不同的實驗中需要優(yōu)化，通常在0.05~1U/ml濃度調(diào)整。

（3） 該酶的最佳反應(yīng)溫度為25℃，其在16~37℃均有活性，65℃ 10min可使該酶失活。

酵母焦磷酸酶試劑恒溫擴(kuò)增使用策略及實例展示

應(yīng)用實例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測結(jié)果，可以看到檢測反應(yīng)<20min(達(dá)平臺期)。

應(yīng)用實例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測結(jié)果。

應(yīng)用實例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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